河豚魚、鰻魚和烤鰻中氯霉素、甲砜霉素和氟苯尼考殘留量的測定——分析條件的選擇

[db:作者] / 2022-12-09 00:00

4.2.1.7分析條件的選擇

(1)提取凈化條件的選擇

1)樣品提取液的選擇

氯霉素、甲砜霉素、氟苯尼考易溶于乙酸乙酯、乙腈。試驗表明，采用堿化乙酸乙酯可提高甲砜霉素回收率，使上述三個化合物回收率都符合要求，對于氟苯尼考胺，堿性條件下，使其呈游離態(tài)，更易被有機溶劑提取。試驗表明用堿化乙酸乙酯提取，達到滿意的提取效率。因此本實驗選用堿化乙酸乙酯作為提取溶劑。分別用乙酸乙酯-25%氨水(100+1)、乙酸乙酯-25%氨水(100+2)和乙酸乙酯-25%氨水(100+3)的堿性乙酸乙酯作為提取液，在同-添加水平，相同實驗條件下，四者均能達到滿意的回收率。但乙酸乙酯-25%氨水(100+3)的堿性乙酸乙酯的回收率實驗更穩(wěn)定。因此在本方法中選擇含有乙酸乙酯-25%氨水(100+3)的堿性乙酸乙酯作為提取液。

2)凈化條件的選擇

樣品的乙酸乙酯萃取液中含有類脂物，需凈化。通過實驗以水-正己烷液液分配除脂，效果明顯且回收率高。

3)殘渣溶解度實驗

樣品的乙酸乙酯萃取液濃縮后，殘渣用水溶解。分別用1mL、2mL、3mL水溶解殘渣，結(jié)果表明1mL、2mL、3mL水溶解殘渣，氯霉素和氟苯尼考的回收率無明顯差異，回收理想。而以1mL水溶解殘渣，甲砜霉素、氟苯尼考胺的回收率稍低，因此采用2mL水溶解殘渣，且超聲5min。

(2)儀器條件的優(yōu)化

1)質(zhì)譜條件的優(yōu)化

蠕動泵以10μL/min的流速連續(xù)注射0.1mg/L的氣霉素類和氟苯尼考胺標(biāo)準(zhǔn)溶液入TurbolonSpray電離源中，氯霉素類結(jié)構(gòu)上有氯原子，在負離子檢測模式的靈敏度高，而氟苯尼考胺結(jié)構(gòu)中不含有氯原子，在正離子檢測模式的靈敏度高。分別在負離子檢測模式下對三種氯霉素類和在正離子檢測模式下對氟苯尼考胺進行一-級質(zhì)譜分析(Q1掃描)，在得到分子離子峰，對各準(zhǔn)分子離子峰進行二級質(zhì)譜分析(子離子掃描)，得到碎片離子信息，氯霉素類二級質(zhì)譜見圖4-6。由此確定定性用的各離子對。

圖4-6 氯霉素、甲砜霉素、氟苯尼考和氟苯尼考胺的子離子全掃描色譜圖

采用MRM模式采集數(shù)據(jù)，選擇駐留時間為200ms，優(yōu)化各離子對的去簇電壓(DP)，碰撞氣能量(CE)，聚焦電壓(FP)，入口電壓(EP)，碰撞池出口電壓(CXP)。

2)色譜條件的優(yōu)化

采用“T”三通方式，即蠕動泵以10μL/min的流速連續(xù)注射0.1mg/L的氯霉素類標(biāo)準(zhǔn)溶液，流動相則以300uL/min的流速與氯霉素類標(biāo)準(zhǔn)溶液混合后進入離子源來進行優(yōu)化。當(dāng)分別用0.1%甲酸、0.1%乙酸、1mmol/L醋酸銨溶液代替流動相組成中的水，未發(fā)現(xiàn)氯霉素類和氟苯尼考胺靈敏度的明顯變化。有報道指出在負離子模式下用乙腈代替流動相中的甲醇會增強信號強度。實驗以乙腈-水作為流動相，未觀察到氯霉素類靈敏度的顯著提高。本方法以甲醇-水作為流動相，靈敏度已足以滿足要求。對于氯霉素類檢測，經(jīng)比較多家品牌的色譜柱，結(jié)果表明在普通C18的2.1mm內(nèi)徑的色譜柱都可滿足，采用了DiscoveryC18柱。氟苯尼考胺在普通的C18不易保留，出峰時間太快，所以考慮采用C8柱，實驗表明其在C8柱上有較好的保留，本方法采用Intersil C8-3柱分析氟苯尼考胺。

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