糖苷醇類代謝試驗

[db:作者] / 2022-11-28 00:00

不同種類微生物的代謝途徑及代謝產(chǎn)物不同，可利用一些生化反應來測定這些代謝產(chǎn)物，生化反應常用來鑒別一些在形態(tài)和其他方面不易區(qū)別的微生物，微生物生化鑒定是微生物分類鑒定中的重要依據(jù)之一，目前，多采用商品化的成套生化試劑盒來完成生化鑒定試驗，所以本書只著重介紹各類生化反應的原理，試驗方法若與試劑盒方法存在差異，以試劑盒方法為準，如需了解試劑配制請參見相關(guān)國家標準。

糖苷醇類代謝試驗

1.三糖鐵(TSI)瓊脂試驗不同微生物分解利用糖類的能力有很大差異，或能利用或不能利用，能利用者，或產(chǎn)氣或不產(chǎn)氣。可用指示劑及發(fā)酵管檢驗。

試驗方法：以接種針挑取待測菌涂布于斜面并穿刺接種，置(36±1)℃培養(yǎng)18～24h，觀察結(jié)果見彩圖1。

本試驗可同時觀察乳糖、葡萄糖和蔗糖發(fā)酵產(chǎn)酸或產(chǎn)酸產(chǎn)氣，產(chǎn)生硫化氫(變黑)。葡萄糖被分解產(chǎn)酸可使斜面先變黃，但因量少，生成的少量酸因接觸空氣而氧化，加之細菌利用培養(yǎng)基中含氮物質(zhì)，生成堿性產(chǎn)物，故使斜面后來又變紅色，底部由于是在厭氧狀態(tài)下，酸類不被氧化，所以仍保持黃色。

2.鄰-硝基酚-β-D-半乳糖苷(ONPG)試驗 ONPG是乳糖的結(jié)構(gòu)類似物，無色的ONPG經(jīng)β-半乳糖苷酶水解后生成黃色的鄰位硝基酚。迅速或遲緩分解乳糖的細菌如埃希菌屬、枸櫞酸桿菌屬、克雷伯菌屬等為陽性。而不發(fā)酵乳糖的細菌如沙門氏菌、變形桿菌等均為陰性。

3.V-P試驗 某些細菌在葡萄糖蛋白胨水培養(yǎng)基中能分解葡萄糖產(chǎn)生丙酮酸，丙酮酸縮合，脫羧成乙酰甲基甲醇，后者在強堿環(huán)境下，被空氣中的氧氣氧化為二乙酰，二乙酰與蛋白胨中的胍基生成紅色化合物，稱V-P(+)反應。

試驗方法：

(1)OMeara氏法。將試驗菌接種于通用培養(yǎng)基，于(36±1)℃培養(yǎng)48h，培養(yǎng)液1mL加OMeara試劑(加有0.3%肌酸或肌酸酐的40%氫氧化鈉水溶液)1mL，搖動試管1～2min，靜置于室溫或(36±1)℃恒溫箱，若4h內(nèi)不呈現(xiàn)紅色，即判定為陰性。亦有主張在48～50℃水浴放置2h后判定結(jié)果者。

(2)Barritt氏法。將試驗菌接種于通用培養(yǎng)基，于(36±1)℃培養(yǎng)4d，培養(yǎng)液2.5mL先加入a-萘酚純酒精溶液0.6mL，再加40%氫氧化鉀水溶液0.2mL，搖動2～5min，陽性菌通常立即呈現(xiàn)紅色，若無紅色出現(xiàn)，靜置于室溫或(36±1)℃恒溫箱，如2h內(nèi)仍不顯現(xiàn)紅色，可判定為陰性。

(3)快速法。將0.5%肌酸溶液2滴放于小試管中，挑取產(chǎn)酸反應的三糖鐵瓊脂斜面培養(yǎng)物一接種環(huán)，乳化接種于其中，加入5% a-萘酚3滴，40%氫氧化鈉水溶液2滴，振動后放置5min，判定結(jié)果。不產(chǎn)酸的培養(yǎng)物不能使用。

本試驗一般用于腸桿菌科各菌屬的鑒別。在用于芽孢桿菌和葡萄球菌和其他細菌時，通用培養(yǎng)基中的磷酸鹽會阻礙乙酰甲基醇的產(chǎn)生，故應省去，或以氯化鈉代替。

4.甲基紅試驗(MR) 腸桿菌科各屬細菌都能發(fā)酵葡萄糖，在分解葡萄糖過程中產(chǎn)生丙酮酸，進一步分解中，由于糖代謝的途徑不同，可產(chǎn)生乳酸、琥珀酸、醋酸和甲酸等各種酸性產(chǎn)物，可使培養(yǎng)基pH下降至4.5以下，使甲基紅指示劑變紅。

試驗方法：挑取新鮮純培養(yǎng)物少許，接種于MR-VP培養(yǎng)基，于(36±1)℃或30℃(以30℃較好)培養(yǎng)3～5d，從第二天起，每日取培養(yǎng)液1mL，加甲基紅指示劑1～2滴，陽性呈鮮紅色，弱陽性呈淡紅色，陰性為黃色，見彩圖2。發(fā)現(xiàn)陽性或至第五天仍為陰性，即可判定結(jié)果。

甲基紅為酸性指示劑，pH范圍為4.4～6.0，其pK值為5.0。故在pH5.0以下，隨酸度增強而增強紅色，在pH5.0以上，則隨堿度增強而增強黃色，在pH5.0或上下接近時，可能變色不夠明顯，此時應延長培養(yǎng)時間，重復試驗。

5.七葉苷水解試驗 某些細菌能水解七葉苷生成七葉素與培養(yǎng)基中枸櫞酸鐵的亞鐵離子起反應，生成黑色的化合物，使培養(yǎng)基變黑。例如，克雷伯菌屬、腸桿菌屬和沙雷菌屬、單增李斯特能水解七葉苷，腸球菌屬和D群鏈球菌也能水解七葉苷，并耐受膽汁。

文章來源：《農(nóng)產(chǎn)品質(zhì)量安全檢測》

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