氯霉素類藥殘留測(cè)定——微生物法和免疫PCR法

時(shí)間：2023-03-25 07:21:47來(lái)源：food欄目：食品快速檢測(cè) 閱讀：

氯霉素類藥殘留測(cè)定——微生物法和免疫PCR法

[db:作者] / 2022-12-09 00:00

4.1.4.2測(cè)定方法

CAPs殘留分析的測(cè)定方法主要有微生物法、免疫分析法、薄層色譜法、毛細(xì)管電泳法、色譜及色質(zhì)聯(lián)用法等。基于抗原抗體特異性反應(yīng)建立起來(lái)的免疫學(xué)測(cè)定方法具有靈敏度較高、特異性強(qiáng)、預(yù)處理簡(jiǎn)單、分析時(shí)間短等優(yōu)點(diǎn)，目前已經(jīng)研制出一些成熟的試劑盒產(chǎn)品，使用方便，有著廣闊的應(yīng)用前景色譜方法可檢出樣品中痕量的殘留藥物，具有檢測(cè)限低、精確度高等特點(diǎn)：而色質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)更是目前唯一有效的確證手段，但是存在著操作復(fù)雜、時(shí)間長(zhǎng)、成本較高的問(wèn)題。

(1)微生物法(microbiological analysis， MA)

微生物法的主要原理是樣品中如有抗生素殘留，則會(huì)對(duì)培養(yǎng)基中的細(xì)菌產(chǎn)生抑菌圈，可以根據(jù)抑菌圈的有無(wú)及大小來(lái)判定結(jié)果。此種方法簡(jiǎn)便、費(fèi)用低，但耗時(shí)長(zhǎng)，敏感性和專一性低，易漏檢，也會(huì)出現(xiàn)假陽(yáng)性，引起誤判，僅適用于對(duì)高殘留量樣品進(jìn)行篩檢。梅先芝等采用棉簽法(STOP)測(cè)定鯉魚肌肉組織殘留的CAP，用棉簽采集組織液后，置于枯草桿菌培養(yǎng)基中，保溫過(guò)夜，觀察抑菌圈有無(wú)及大小判斷殘留。該方法LOD為1.00u/g。焦彥朝等采用氯化三苯基四氮唑法(TTC)測(cè)定鯉魚肌肉組織CAP殘留，通過(guò)用TTC染色，量取抑菌圈直徑，計(jì)算檢測(cè)限及回收率。該方法平均回收率為51.3%～69.2%，LOD為0.25ug/g。

6)免疫PCR法(immuno polymerase chain reaction， IPCR)

IPCR是利用抗原抗體反應(yīng)的特異性和PCR擴(kuò)增反應(yīng)的極高靈敏性而建立的一種微量抗原檢測(cè)技術(shù)。是用一段已知DNA分子標(biāo)記抗體作為探針，用此探針與待測(cè)抗原反應(yīng)，PCR擴(kuò)增黏附在抗原抗體復(fù)合物上的這段DNA分子，電泳定性，根據(jù)特異性PCR產(chǎn)物的有無(wú)，來(lái)判斷待測(cè)抗原是否存在。劉京在制備CAP全抗原的基礎(chǔ)上，研制抗CAP單克隆抗體，利用抗CAP單克隆抗體建立IPCR分析法，檢測(cè)牛奶中CAP的殘留。以BSA、OVA為載體蛋白，采用EDC法制備CAP全抗原，免疫小鼠，制備抗CAP多克隆抗體。采用細(xì)胞融合和雜交瘤分選技術(shù)，經(jīng)過(guò)篩選和亞克隆，成功獲得能穩(wěn)定分泌抗CAP單克隆抗體的細(xì)胞株1B7，接種于Balb/c小鼠腹腔，得到的小鼠腹水經(jīng)純化后效價(jià)為1：512000。以該抗體建立ELISA競(jìng)爭(zhēng)抑制標(biāo)準(zhǔn)曲線，IC50和LOD分別為7.39ng/mL、0.24ng/mL，與CAPs的交叉率高達(dá)2052.8%，與其他藥物未見明顯交叉。當(dāng)抗原包被濃度為10μg/mL，生物素?；贵w的工作濃度為1：64000，親和素工作濃度為10μg/mL，生物素標(biāo)記的DNA投入量為10pg時(shí)，建立的IPCR方法LOD為1.380pg/mL，批內(nèi)、批間CV均小于10%。用于牛奶樣品中CAP檢測(cè)時(shí)，回收率為86.8%～106.0%，RSD為4.94%～7.51%。

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