農(nóng)藥殘留檢測(cè)新方法開發(fā)原則（二）

時(shí)間：2023-03-25 15:52:36來源：food欄目：食品快速檢測(cè) 閱讀：

農(nóng)藥殘留檢測(cè)新方法開發(fā)原則（二）

[db:作者] / 2022-11-28 00:00

5.定性鑒定所謂定性鑒定，就是確定色譜峰的歸屬。對(duì)于簡(jiǎn)單的樣品，可通過標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)對(duì)照來定性，即在相同的色譜條件下，分別注射標(biāo)準(zhǔn)樣品和實(shí)際樣品，根據(jù)保留值即可確定色譜圖上哪個(gè)峰是要分析的組分。定性時(shí)必須注意，在同一色譜柱上，不同化合物可能有相同的保留值。所以，對(duì)未知樣品的定性僅僅用一個(gè)保留數(shù)據(jù)是不夠的。雙柱或多柱保留指數(shù)定性是GC中較為可靠的方法，因?yàn)椴煌幕衔镌诓煌V柱上具有相同保留值的概率要小得多。對(duì)于復(fù)雜的樣品，則要通過保留指數(shù)和/或氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用法來定性。事實(shí)上，質(zhì)譜是目前定性的首選方法，它可以給出相應(yīng)色譜峰的分子結(jié)構(gòu)信息，同時(shí)還能做定量分析。但我們應(yīng)清楚，氣相色-質(zhì)譜聯(lián)用法并不總是可靠的，尤其是一些同分異構(gòu)體，它們的質(zhì)譜圖往往非常相似，故計(jì)算機(jī)檢索結(jié)果有時(shí)是不正確的。只有當(dāng)GC保留指數(shù)和MS圖的鑒定結(jié)果相吻合時(shí)，定性的可靠性才是有保障的。

在日常分析中，有時(shí)因?yàn)榉治鰳悠妨看蠡蛘邩悠坊|(zhì)復(fù)雜，導(dǎo)致進(jìn)樣口端的色譜柱受到污染，對(duì)我們的分析產(chǎn)生影響。此時(shí)，我們需要將色譜柱割掉一段來去除污染影響。當(dāng)使用SIM模式采集數(shù)據(jù)時(shí)，在色譜柱維護(hù)后，化合物的保留時(shí)間就會(huì)因?yàn)樯V柱變短而出現(xiàn)前移，此時(shí)如果還使用原有的采集窗口，就會(huì)出現(xiàn)個(gè)別化合物實(shí)際出峰時(shí)間提前于窗口的采集時(shí)間，從而導(dǎo)致該化合物漏采。因此，為了避免漏采數(shù)據(jù)，每次色譜柱維護(hù)后，我們必須對(duì)質(zhì)譜分析方法中化合物采集窗口的時(shí)間及時(shí)更新。通常選擇人工的方式將各采集時(shí)間段進(jìn)行更新，但相對(duì)來說非常麻煩、費(fèi)時(shí)。目前有些儀器利用定位標(biāo)志化合物，通過計(jì)算調(diào)節(jié)柱前壓或者載氣流速來自動(dòng)調(diào)整保留時(shí)間。

6.定量分析這一步驟是要確定用什么定量方法來測(cè)定待測(cè)組分的含量。常用的色譜定量方法不外乎峰面積(或峰高)百分比法、歸一化法、外標(biāo)法、內(nèi)標(biāo)法和標(biāo)準(zhǔn)加入法(又稱為疊加法)。

(1)峰面積(或峰高)百分比法。此法最簡(jiǎn)單，但最不準(zhǔn)確。當(dāng)樣品由同系物組成，或者只是為了粗略地定量時(shí)，則可以選擇該法。在有機(jī)合成過程中，監(jiān)測(cè)產(chǎn)物的變化時(shí)常用此法進(jìn)行相對(duì)定量。因?yàn)椴煌幕衔镌谕粭l件下、同一檢測(cè)器上的響應(yīng)因子(單位峰面積代表的樣品量)往往不同，故須用標(biāo)準(zhǔn)樣品測(cè)定響應(yīng)因子進(jìn)行校正后，方可得到準(zhǔn)確的定量結(jié)果。其他幾種定量方法均需要校正。

(2)歸一化法。相比起來，歸一化法較為復(fù)雜，它要求樣品中所有的組分均出峰，且要求有所有組分的標(biāo)準(zhǔn)品才能定量，故很少采用。

(3)外標(biāo)法。此法用得較多，只要用一系列濃度的標(biāo)準(zhǔn)樣品作出工作曲線(樣品量或濃度對(duì)峰面積作圖)，就可在完全一致的條件下對(duì)未知樣品進(jìn)行定量分析。只要待測(cè)組分出峰且分離完全即可，而不考慮其他組分是否出峰和是否分離完全。需要強(qiáng)調(diào)，外標(biāo)法定量時(shí)，分析條件必須嚴(yán)格重現(xiàn)，特別是進(jìn)樣量。如果測(cè)定未知物和測(cè)定工作曲線時(shí)的條件有所不同，就會(huì)導(dǎo)致較大的定量誤差。還應(yīng)注意，外標(biāo)工作曲線最好與未知樣品同時(shí)測(cè)定，或者定期重新測(cè)定工作曲線，以保證定量準(zhǔn)確度。

(4)內(nèi)標(biāo)法。相對(duì)而言，內(nèi)標(biāo)法的定量精度最高，因?yàn)樗怯孟鄬?duì)內(nèi)標(biāo)物的響應(yīng)值來定量的。內(nèi)標(biāo)物要分別加到標(biāo)準(zhǔn)樣品和未知樣品中，而且量要相同。這樣就可抵消由于操作條件(包括進(jìn)樣量)的波動(dòng)帶來的誤差。與外標(biāo)法類似，內(nèi)標(biāo)法只要求待測(cè)組分出峰且分離完全即認(rèn)可，其余組分則可通過快速升高柱溫使其流出或用反吹法將其放空，這樣就可達(dá)到縮

短分析時(shí)間的目的。盡管如此，但要找到一個(gè)合適的內(nèi)標(biāo)物并不容易，因?yàn)槔硐氲膬?nèi)標(biāo)物的保留時(shí)間和響應(yīng)因子應(yīng)該與待測(cè)物盡可能接近，且要完全分離。此外，用內(nèi)標(biāo)法定量時(shí)，樣品制備過程要多一個(gè)定量加入內(nèi)標(biāo)物的步驟，標(biāo)準(zhǔn)樣品和未知樣品均要加入一定量的內(nèi)標(biāo)物。因此，如果對(duì)定量精度要求不高，則應(yīng)避免使用內(nèi)標(biāo)法。

(5)標(biāo)準(zhǔn)加入法。此法是在未知樣品中定量加入待測(cè)物的標(biāo)準(zhǔn)品，然后根據(jù)峰面積(或峰高)的增加量來進(jìn)行定量計(jì)算。其樣品制備過程與內(nèi)標(biāo)法類似，但計(jì)算原理則完全是來自外標(biāo)法。標(biāo)準(zhǔn)加入法的定量精度介于內(nèi)標(biāo)法和外標(biāo)法之間。

在上述各種定量方法中，峰面積均可用峰高代替。理論上講，濃度型檢測(cè)器用峰高定量較準(zhǔn)確，而質(zhì)量型檢測(cè)器用峰面積定量更準(zhǔn)確。在實(shí)際操作中，影響峰高和峰面積的因素有多種，不僅載氣流速和柱溫對(duì)其有影響，而且檢測(cè)器的結(jié)構(gòu)設(shè)計(jì)等均有影響。綜合考慮各種因素，峰面積定量一般比峰高定量準(zhǔn)確。然而，當(dāng)峰未完全分離時(shí)，面積積分準(zhǔn)確度會(huì)下降，此時(shí)用峰高定量不失為一種合理的選擇。

圖2-3 為檢測(cè)方法開發(fā)的一般步驟。

圖2-3 檢測(cè)方法開發(fā)的一般步驟

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