農(nóng)藥殘留檢測新方法開發(fā)原則（二）

時間：2023-03-25 15:52:36來源：food欄目：食品快速檢測閱讀：

農(nóng)藥殘留檢測新方法開發(fā)原則（二）

[db:作者] / 2022-11-28 00:00

5.定性鑒定所謂定性鑒定，就是確定色譜峰的歸屬。對于簡單的樣品，可通過標準物質對照來定性，即在相同的色譜條件下，分別注射標準樣品和實際樣品，根據(jù)保留值即可確定色譜圖上哪個峰是要分析的組分。定性時必須注意，在同一色譜柱上，不同化合物可能有相同的保留值。所以，對未知樣品的定性僅僅用一個保留數(shù)據(jù)是不夠的。雙柱或多柱保留指數(shù)定性是GC中較為可靠的方法，因為不同的化合物在不同色譜柱上具有相同保留值的概率要小得多。對于復雜的樣品，則要通過保留指數(shù)和/或氣相色譜-質譜聯(lián)用法來定性。事實上，質譜是目前定性的首選方法，它可以給出相應色譜峰的分子結構信息，同時還能做定量分析。但我們應清楚，氣相色-質譜聯(lián)用法并不總是可靠的，尤其是一些同分異構體，它們的質譜圖往往非常相似，故計算機檢索結果有時是不正確的。只有當GC保留指數(shù)和MS圖的鑒定結果相吻合時，定性的可靠性才是有保障的。

在日常分析中，有時因為分析樣品量大或者樣品基質復雜，導致進樣口端的色譜柱受到污染，對我們的分析產(chǎn)生影響。此時，我們需要將色譜柱割掉一段來去除污染影響。當使用SIM模式采集數(shù)據(jù)時，在色譜柱維護后，化合物的保留時間就會因為色譜柱變短而出現(xiàn)前移，此時如果還使用原有的采集窗口，就會出現(xiàn)個別化合物實際出峰時間提前于窗口的采集時間，從而導致該化合物漏采。因此，為了避免漏采數(shù)據(jù)，每次色譜柱維護后，我們必須對質譜分析方法中化合物采集窗口的時間及時更新。通常選擇人工的方式將各采集時間段進行更新，但相對來說非常麻煩、費時。目前有些儀器利用定位標志化合物，通過計算調節(jié)柱前壓或者載氣流速來自動調整保留時間。

6.定量分析這一步驟是要確定用什么定量方法來測定待測組分的含量。常用的色譜定量方法不外乎峰面積(或峰高)百分比法、歸一化法、外標法、內標法和標準加入法(又稱為疊加法)。

(1)峰面積(或峰高)百分比法。此法最簡單，但最不準確。當樣品由同系物組成，或者只是為了粗略地定量時，則可以選擇該法。在有機合成過程中，監(jiān)測產(chǎn)物的變化時常用此法進行相對定量。因為不同的化合物在同一條件下、同一檢測器上的響應因子(單位峰面積代表的樣品量)往往不同，故須用標準樣品測定響應因子進行校正后，方可得到準確的定量結果。其他幾種定量方法均需要校正。

(2)歸一化法。相比起來，歸一化法較為復雜，它要求樣品中所有的組分均出峰，且要求有所有組分的標準品才能定量，故很少采用。

(3)外標法。此法用得較多，只要用一系列濃度的標準樣品作出工作曲線(樣品量或濃度對峰面積作圖)，就可在完全一致的條件下對未知樣品進行定量分析。只要待測組分出峰且分離完全即可，而不考慮其他組分是否出峰和是否分離完全。需要強調，外標法定量時，分析條件必須嚴格重現(xiàn)，特別是進樣量。如果測定未知物和測定工作曲線時的條件有所不同，就會導致較大的定量誤差。還應注意，外標工作曲線最好與未知樣品同時測定，或者定期重新測定工作曲線，以保證定量準確度。

(4)內標法。相對而言，內標法的定量精度最高，因為它是用相對內標物的響應值來定量的。內標物要分別加到標準樣品和未知樣品中，而且量要相同。這樣就可抵消由于操作條件(包括進樣量)的波動帶來的誤差。與外標法類似，內標法只要求待測組分出峰且分離完全即認可，其余組分則可通過快速升高柱溫使其流出或用反吹法將其放空，這樣就可達到縮

短分析時間的目的。盡管如此，但要找到一個合適的內標物并不容易，因為理想的內標物的保留時間和響應因子應該與待測物盡可能接近，且要完全分離。此外，用內標法定量時，樣品制備過程要多一個定量加入內標物的步驟，標準樣品和未知樣品均要加入一定量的內標物。因此，如果對定量精度要求不高，則應避免使用內標法。

(5)標準加入法。此法是在未知樣品中定量加入待測物的標準品，然后根據(jù)峰面積(或峰高)的增加量來進行定量計算。其樣品制備過程與內標法類似，但計算原理則完全是來自外標法。標準加入法的定量精度介于內標法和外標法之間。

在上述各種定量方法中，峰面積均可用峰高代替。理論上講，濃度型檢測器用峰高定量較準確，而質量型檢測器用峰面積定量更準確。在實際操作中，影響峰高和峰面積的因素有多種，不僅載氣流速和柱溫對其有影響，而且檢測器的結構設計等均有影響。綜合考慮各種因素，峰面積定量一般比峰高定量準確。然而，當峰未完全分離時，面積積分準確度會下降，此時用峰高定量不失為一種合理的選擇。

圖2-3 為檢測方法開發(fā)的一般步驟。

圖2-3 檢測方法開發(fā)的一般步驟

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