大環(huán)內(nèi)酯類和林可胺類藥物殘留測定方法——免疫分析法

時間：2023-03-25 06:15:10來源：food欄目：食品快速檢測閱讀：

大環(huán)內(nèi)酯類和林可胺類藥物殘留測定方法——免疫分析法

[db:作者] / 2022-12-12 00:00

(7)免疫分析法(immuneanalysis，IA)

免疫分析是以抗原與抗體的特異性、可逆性結(jié)合反應(yīng)為基礎(chǔ)的分析技術(shù)，適用于復(fù)雜基質(zhì)中痕量組分的分離或檢測，于20世紀(jì)80年代逐漸應(yīng)用于藥物殘留分析。MALs和林可胺類藥物殘留的免疫分析中主要采用酶聯(lián)免疫吸附法(enzyme linked immunosorbent assay，ELISA)、熒光免疫分析法(fluoroimmunoassay，F(xiàn)IA)以及免疫層析檢測方法(immunochromatographic assay，ICA)。

Silverlight等報道了替米考星的ELISA測定法。選擇與替米考星結(jié)構(gòu)相關(guān)的desmycocin(tylosinB DES)合成模擬替米考星的半抗原和人工抗原，載體為卵清蛋白(OVA)。直接競爭ELISA結(jié)果表明，DES抗體能識別替米考星和泰樂菌素，交叉反應(yīng)率分別為100%和96%。利用DES抗體建立的ELISA檢測肺組織中的替米考星，LOD為0.01mg/kg。由于該ELISA方法在抗原制備和抗體獲取上存在困難，在MALs殘留分析中的使用還很少見。何方洋等通過對林可霉素分子結(jié)構(gòu)進(jìn)行改造，合成了半抗原及人工抗原免疫動物，制備了林可霉素的鼠單克隆抗體，利用獲得的單抗建立了ELISA方法。該方法的靈敏度為0.2μg/L；對林可霉素的交叉反應(yīng)率為100%，對克林霉素、紅霉素、泰樂菌素、鏈霉素、卡那霉素的交叉反應(yīng)率均小于1%；在20μg/kg和40μg/kg添加水平的雞肉樣品中回收率范圍為83.5%～96.5%，CV小于15%。

Ye等建立了一種間接競爭FIA法來檢測牛奶中的磺胺二甲嘧啶、泰樂菌素和鏈霉素殘留量。牛血清蛋白(BSA)連接的半抗原固定于載玻片上，此系統(tǒng)包括四塊載玻片，其中包括密封忌水的96孔板，樣品的處理類似于ELISA方法，針對三種藥物的單克隆抗體可滿足其同時檢測。二抗物質(zhì)帶有一個Cy5分子，可以產(chǎn)生熒光，其信號強(qiáng)弱可被掃描監(jiān)測。該方法的LOD分別為3.26ng/mL(磺胺二甲嘧啶)、2.01ng/mL(鏈霉素)、6.37ng/mL(泰樂菌素)，遠(yuǎn)遠(yuǎn)低于規(guī)定的泰樂菌素的MRL。

Le等開發(fā)了一種ICA方法，應(yīng)用在肌肉、肝臟、魚和雞蛋中殘留泰樂菌素和替米考星的檢測。該方法基于競爭原理，通過掃描最佳納米金標(biāo)記單克隆抗體量，來有效改善其靈敏度。用新型納米金粒子標(biāo)記，利用ICA法，10分鐘便可完成測定。對于泰樂菌素和替米考星，視覺LOD值分別為10ng/g和20ng/g；泰樂菌素和替米考星基質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)曲線范圍為0.1～100ng/mL；泰樂菌素和替米考星的IC50值為分別2.9ng/mL和4.1ng/mL；回收率范圍在71.5%～103.2%之間；添加濃度為10～100ng/g時，其CV小于14.1%。該ICA的分析結(jié)果與ELISA和HPLC的測定結(jié)果一致。

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