β-受體激動(dòng)劑殘留測(cè)定方法（三）

時(shí)間：2023-03-25 08:16:58來(lái)源：food欄目：食品快速檢測(cè) 閱讀：

β-受體激動(dòng)劑殘留測(cè)定方法（三）

[db:作者] / 2022-12-08 00:00

(7)色-質(zhì)聯(lián)用分析法(chromatography-mass spectrometry analysis)

將色譜的高分離能力與質(zhì)譜的定性能力結(jié)合起來(lái)，組成的聯(lián)用分析技術(shù)，不僅可以取長(zhǎng)補(bǔ)短，起到方法間的協(xié)同作用，提高方法的靈敏度、準(zhǔn)確度以及對(duì)復(fù)雜混合物的分辨能力，同時(shí)還能獲得兩種手段各自單獨(dú)使用時(shí)所不具備的某些功能。應(yīng)用于β-受體激動(dòng)劑殘留分析的主要是氣相色譜-質(zhì)譜法(GC-MS)、液相色譜-質(zhì)譜法(LC-MS)以及毛細(xì)管電泳-質(zhì)譜法(CE-MS)。

1)氣相色譜-質(zhì)譜法(gas chromatography-mass spectrometry，GC-MS)

GC-MS是β-受體激動(dòng)劑殘留檢測(cè)中使用最多的分析方法，具有很高的特異性，能在多種殘留物同時(shí)存在的情況下對(duì)某種特定的殘留物進(jìn)行定性和定量分析。

Solans 等采用GC-MS分析尿樣中β-受體激動(dòng)劑的殘留情況。樣品經(jīng)β-葡萄糖醛酸酶芳基硫酸酯酶水解后，用Bond-Elut Certify提取，β-受體激動(dòng)劑通過(guò) N-甲基-N-三甲基硅烷基三氟乙酰胺(MSTFA)衍生后，再由GC-MS在全掃描(Scan)模式下分析，選擇離子監(jiān)測(cè)(SIM)模式定量。朱堅(jiān)等到對(duì)GC-MS同時(shí)測(cè)定肝、腎和肉中11種β-受體激動(dòng)劑殘留的方法進(jìn)行了研究。樣品經(jīng)pH5.2的乙酸鈉緩沖溶液提取，提取液用β-鹽酸葡萄糖醛苷酶芳基硫酸酯酶水解，用高氯酸沉淀蛋白質(zhì)，經(jīng)異丙醇乙酸乙酯(6+4，v/v)液液分配，再經(jīng)陽(yáng)離子交換樹(shù)脂(SCX)小柱凈化后，用BSTFA衍生化，以美托洛爾為內(nèi)標(biāo)，GC-MS在電子轟擊(El)電離源、SIM模式下檢測(cè)。方法回收率為71%～94%，CV為4.6%～18.7%，最低檢測(cè)限為0.002～0.0005mg/kg。孟娟等采用類似的技術(shù)測(cè)定了動(dòng)物組織中克倫特羅、沙丁胺醇、妥布特羅、特布它林、噴布特羅、心得安、倍他索洛爾、非諾特羅等8種β-受體激動(dòng)劑的殘留量。GC-MS在EI電離源、SIM模式下檢測(cè)，方法回收率范圍為51.9%～101.7%，RSD為2.7%～16.0%。田苗建立了豬肉、豬肝、豬腎中10種β-受體激動(dòng)劑殘留量的檢測(cè)方法。樣品經(jīng)乙酸鈉緩沖溶液提取后，依次經(jīng)液液萃取、陽(yáng)離子交換柱凈化，再經(jīng)BSTFA-三甲基氯硅烷(TMCS)(99+1，v/v)衍生，GC-MS檢測(cè)。該方法線性關(guān)系良好，相關(guān)系數(shù)2大于0.996，檢出限為1～5ug/kg；對(duì)豬組織樣品的室內(nèi)平均回收率為59%～77%，RSD為0.87%～7.0%，室間平均回收率為63%～76%，RSD為1.5%～12.6%。

Amendola等國(guó)采用氣相色譜-離子阱質(zhì)譜(GC-MSn)分析尿樣中克倫特羅的殘留情況?？藗愄亓_衍生物用EI源電離，通過(guò)三級(jí)質(zhì)譜得到了充分的結(jié)構(gòu)信息。MS1為m/z 335～337，MS2為m/z 300，但在四級(jí)質(zhì)譜中沒(méi)有發(fā)現(xiàn)進(jìn)一步確證的結(jié)構(gòu)信息，并且沒(méi)有提高信噪比。MS3的靈敏度優(yōu)于0.2ug/L，線性范圍在0.5～5ug/L之間。作者認(rèn)為，與GC-MS和氣相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜(GC-MS/MS)相比，GC-MS3也是β-受體激動(dòng)劑確證檢測(cè)的良好手段。

Batjoens等采用GC-MS對(duì)動(dòng)物糞便中β-受體激動(dòng)劑的殘留情況進(jìn)行分析。通過(guò)不同的離子化模式(EI、Cl)、不同的衍生化方法以及串聯(lián)質(zhì)譜比較研究，獲得了大量的質(zhì)譜信息。在El電離方式下，部分β-受體激動(dòng)劑TMS衍生物的質(zhì)譜斷裂途徑參見(jiàn)圖1-3。

圖1-3部分 β-受體激動(dòng)劑TMS衍生物的EI斷裂途徑

2)液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用法(liquid chromatography-mass spectrometry，LC-MS)

HPLC方法由于檢測(cè)器選擇性的限制，導(dǎo)致靈敏度相對(duì)較低。但隨著電噴霧(ESI)接口技術(shù)的成熟，使LC-MS在β-受體激動(dòng)劑分析領(lǐng)域迅速得到發(fā)展。同時(shí)，由于串聯(lián)質(zhì)譜技術(shù)(MS/MS)的出現(xiàn)，質(zhì)譜檢測(cè)器的選擇性和靈敏度得到了進(jìn)一步的提升，定性同時(shí)進(jìn)行定量，使得LC-MS在β-受體激動(dòng)劑檢測(cè)領(lǐng)域得到普及，并逐步取代GC-MS成為應(yīng)用最為廣泛的現(xiàn)代分析技術(shù)。

Caloni等采用LC-MS技術(shù)對(duì)經(jīng)ELISA試劑盒篩選的代乳制品中陽(yáng)性結(jié)果進(jìn)行了復(fù)核，可以同時(shí)確證沙丁胺醇、馬布特羅、克倫特羅和特布它林。馬布特羅、克倫特羅和特布它林的檢測(cè)低限為250ng/mL，沙丁胺醇為2.5ug/L，方法回收率為84%～90.2%。

劉暢等建立了動(dòng)物源性食品中15種β-受體激動(dòng)劑殘留的LC-MS/MS檢測(cè)方法。選用β-鹽酸葡萄糖醛苷酶-芳基硫酯酶水解，PCX柱凈化，以乙腈-甲醇-0.4%甲酸(30+4+66，v/v)作為流動(dòng)相，LC-MS/MS檢測(cè)。采用外標(biāo)法定量，15種β-受體激動(dòng)劑的平均回收率為54.0%～98.9%，最低檢出濃度為0.04～0.33ug/kg。Liu等利用LC-MS/MS技術(shù)，在ESI正離子、多反應(yīng)監(jiān)測(cè)(MRM)模式下，建立了豬肝和豬肉中20種β-受體激動(dòng)劑的測(cè)定方法。為減小基質(zhì)效應(yīng)的影響，采用基質(zhì)添加標(biāo)準(zhǔn)曲線定量，CCa為0.05～0.23 ug/kg(豬肉)、0.05～0.57 ug/kg(豬肝)，CCβ為0.11～0.4ug/kg(豬肉)、0.16～0.79ug/kg(豬肝)。孫志文等利用LC-MS/MS測(cè)定了豬肌肉組織中苯乙醇胺A的殘留量。色譜柱為ACQUITY UPLC BEH C18柱(2.1mm×50mm，1.7um)，流動(dòng)相為乙腈-0.1%甲酸水溶液(30+70，v/v)，流速0.3mL/min，在ESI正離子模式下，采用MRM模式檢測(cè)。方法檢測(cè)限為0.2ug/kg。

王娟等建立了LC-MS/MS同時(shí)檢測(cè)牛奶中10種β-受體激動(dòng)劑殘留量的方法。樣品經(jīng)沉淀蛋白質(zhì)，酸性水溶液提取，MCX固相萃取柱凈化，LC-MS/MS方法測(cè)定。采用Thermo Hypersil Gold(150mm×2.1mm，5um)色譜柱分離，5mmol/L乙酸銨水溶液-甲醇為流動(dòng)相，梯度洗脫。方法線性相關(guān)系數(shù)r均大于0.999；克倫特羅LOD為1.68ug/kg，其余9種β-受體激動(dòng)劑在0.146～0.203ug/kg之間；克倫特羅LOQ為3.37ug/kg，其余9種在0.290～0.407ug/kg之間；3個(gè)添加水平下，10種β-受體激動(dòng)劑平均回收率在91%～127%之間。聶建榮等]建立動(dòng)物尿液中15種β-受體激動(dòng)劑的LC-ESI-MS/MS同時(shí)分析方法。樣品用高氯酸溶液酸解及沉淀蛋白質(zhì)，經(jīng)HLB固相萃取小柱凈化、富集后，以甲醇和0.1%甲酸水溶液作為流動(dòng)相進(jìn)行梯度洗脫，采用MRM模式進(jìn)行定性和定量分析。15種β-受體激動(dòng)劑在0.25～20μg/L的范圍內(nèi)線性關(guān)系良好(r≥0.9995)；在0.25ug/L、1.0ug/L、10μg/L添加水平下，方法回收率為62.1%～107%，RSD為3.5%～9.9%；LOQ為0.25μg/L。

Fan等的應(yīng)用高效液相色譜-線性離子阱質(zhì)譜(HPLC-LIT-MS)法建立了同時(shí)測(cè)定動(dòng)物源食品中25種β-受體激動(dòng)劑殘留的分析方法。樣品水解后用5%三氯乙酸提取，然后用MCX柱結(jié)合甲醇進(jìn)行凈化。以甲醇和0.1%甲酸水作為梯度洗脫的流動(dòng)相，Supelco Ascentis Express RP-酰胺柱進(jìn)行LC分離后，在ESI+、多重反應(yīng)監(jiān)測(cè)(CRM)模式下進(jìn)行測(cè)定，將由氟標(biāo)記的9種β-受體激動(dòng)劑作內(nèi)標(biāo)進(jìn)行定量。分析物的線性范圍為5～200ug/L，線性相關(guān)系數(shù)大于或等于0.995；添加回收率在46.6%～118.9%之間，RSD為1.9%～28.2%；方法CCa和CCβ范圍分別為0.05～0.49 μg/kg和0.13～1.64ug/kg。

在LC-ESI-MS分析中，β-受體激動(dòng)劑的斷裂途徑參見(jiàn)圖1-4。

圖1-4 β 受體激動(dòng)劑ES1質(zhì)譜斷裂途徑

3)毛細(xì)管電泳-質(zhì)譜法(capillary electrophoresis-mass spectrometry，CE-MS)毛細(xì)管電泳-質(zhì)譜技術(shù)(CE-MS)在β-受體激動(dòng)劑的分析中應(yīng)用較少。

Anurukvorakun等采用非水毛細(xì)管電泳-質(zhì)譜(NACE-MS)技術(shù)建立了豬肉中痕量β-受體激動(dòng)劑(克倫特羅、沙丁胺醇、特布特羅等)的測(cè)定方法。NACE采用甲醇-乙-冰醋酸(66+33+1，v/v，含18mmol/L乙酸銨)緩沖溶液，電壓28kV，飛行時(shí)間質(zhì)譜(TOF-MS)采用甲醇-水(80+20，v/v含5mmol/L乙酸銨)為鞘液，水動(dòng)力和電動(dòng)力聯(lián)合進(jìn)樣，提高了方法靈敏度。該方法對(duì)所有分析物的檢測(cè)限均為0.3ppb，線性范圍為0.8～1000ppb，相關(guān)系數(shù)大于0.999，方法回收率為69%～80%，RSD小于17.7%。通過(guò)與LC-MS/MS方法進(jìn)行比較驗(yàn)證，沒(méi)有發(fā)現(xiàn)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。van der Vlis等建立了一種在線液液電萃取-等速電泳-毛細(xì)管區(qū)帶電泳-電噴霧質(zhì)譜(EE-ITP-CZE-ESP-MS)方法分析鹽酸克倫特羅、沙丁胺醇、特布它林和非諾特羅。在高電場(chǎng)力作用下，通過(guò)液液萃取快速將離子化的β-受體激動(dòng)劑從低導(dǎo)電率的有機(jī)溶劑萃取到一個(gè)小體積的緩沖溶液中，而ITP使分析物遠(yuǎn)離液-液界面，再經(jīng)毛細(xì)管區(qū)帶電泳-電噴霧質(zhì)譜測(cè)定。鹽酸克倫特羅、沙丁胺醇和特布它林的檢測(cè)限可達(dá)到2×10-9 mol/L，非諾特羅為5×10-9mol/L。

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